Fehlgespleißte Transkripte sind ein bekannter molekularer Pathomechanismus genetischer Erkrankungen. Die häufige tief-intronische USH2A:c.7595-2144A>G Variante verursacht Usher-Syndrom oder Retinitis pigmentosa. Wir beschreiben zwei CRISPR/Cas9-Strategien zur Korrektur dieses Spleißdefekts: SpCas9 und Enhanced Deletion Cas9 (EDCas9), eine TREX2-Cas9-Fusionsvariante. EDCas9 übertraf SpCas9 durch höhere Wiederherstellungsrate korrekt gespleißter Transkripte, konsistentem Mutationsprofil mit gerichteten Deletionen in Minigen-Assays und Patienten-Fibroblasten, sowie sicherem Off-Target-Profil ohne chromosomale Translokationen oder großen Deletionen. Die erfolgreiche EDCas9-Übertragung mittels virusähnlicher Partikel betont das klinische Translations-Potenzial. Dies ist ein bedeutender Fortschritt für CRISPR-basierte Therapieansätze und etabliert EDCas9 als vielversprechende Strategie zur Korrektur von Spleißdefekten. Unser Ansatz ist breit auf andere pathogene Spleißvarianten übertragbar und hat zukunftsweisende Implikationen für die Gentherapie verschiedenster genetischer Erkrankungen